Welche Testmethoden gibt es zur Diagnose von RET-Veränderungen bei Therapie mit Retsevmo® (Selpercatinib)?

Inhalt

• RET-alterierte Krebserkrankungen
• Molekulare Tumortestung
• Klinische Leitlinien zur Testung
• Nicht-kleinzelliges Lungenkarzinom
• Schilddrüsenkarzinom
• Referenzen

RET-alterierte Krebserkrankungen

Der Begriff „rearranged during transfection“ (RET)-alterierte Krebserkrankungen umfasst zwei Gruppen von genetischen Veränderungen: RET-Fusionen und RET-Mutationen.^1,2

Diese Alterationen aktivieren nachgeschaltete RET-Signalwege, die die Zellproliferation und das Überleben in Krebserkrankungen fördern.¹

Molekulare Tumortestung

Eine frühzeitige umfassende genomische Testung wurde mit verbesserten Behandlungsergebnissen der Patienten in Verbindung gebracht, einschließlich eines verbesserten Gesamtüberlebens.^3-5 Umgekehrt kann eine Einzelgen-Testung die zukünftige umfassende Gentestung aufgrund einer begrenzten Gewebeverfügbarkeit und eines eingeschränkten Spektrums an initial nicht untersuchten Mutationen negativ beeinflussen.⁵

Molekulare Tumortestung wird durchgeführt, um

• eine Diagnose durch Identifizierung von Tumormerkmalen zu erleichtern
• prädiktive und prognostische Biomarker zu identifizieren, die bei der Betrachtung möglicher klinischer Ergebnisse verwendet werden können
• geeignete Patienten für klinische Studien und zielgerichtete oder systemische Therapien zu identifizieren.⁶

Molekulare Testung kann auch behandelbare genomische Alterationen identifizieren, definiert als genomische Alterationen, die ein aktuelles oder in der Prüfung befindliches Arzneimittel direkt oder indirekt adressiert.⁷

Next-Generation Sequencing (NGS) ist eine breite, umfassende Testmethode, die DNA und/oder RNA analysiert, um RET nachzuweisen. ⁸ Diese Methode ermöglicht Multiplex-Testungen an einer kleinen Gewebemenge sowie den Nachweis sowohl häufiger als auch seltener krebsassoziierter Biomarker.⁹ Die NGS-Plattform

• ermöglicht den präzisen und sensitiven Nachweis von Genfusionen, Mutationen und Amplifikationen
• bietet die potenzielle Identifizierung von RET-Fusionen als In-Frame-Ereignisse, und
• ermöglicht den Nachweis vorgeschalteter Partner und begleitender genomischer Alterationen, die andere Gene als RET involviert.^1,8-10

Next-Generation Sequencing eignet sich für formalinfixierte, in Paraffin eingebettete Proben und kann für die Analyse von Liquid-Biopsy-Proben angepasst werden.⁸

Obwohl sie für den Patienten invasiver ist, wird die Gewebetestung bevorzugt, weil

• die Möglichkeit besteht, dass eine RET-Alteration, die in einer Biopsie nachgewiesen wird, im Blut mittels Liquid-Biopsy möglicherweise nicht nachweisbar ist, und
• bis zu 30 % der RET-Alterationen übersehen werden können, wenn nur zirkulierende Tumor-DNA (ctDNA) getestet wird.^11,12

Zusätzlich zu NGS werden mehrere Testmethoden zur Diagnose von RET-Mutationen verwendet. Tabelle 1 bietet einen Überblick über RET-Testmethoden, aufgeführt in absteigender Reihenfolge der Eignung. 

Abkürzungen: cDNA = Complementary deoxyribonucleic acid; FISH = Fluorescence in situ hybridization; FN = Falsch-negativ; FP = Falsch-positiv; IHC = Immunhistochemie; NGS = Next-generation sequencing; PCR = Polymerase chain reaction; RET = Rearranged during transfection; RT = Reverse Transkription.

^a Aufgeführt in absteigender Reihenfolge der Eignung.

Klinische Leitlinien zur Testung

Gemäß einer kürzlich veröffentlichten Leitlinie der European Society for Medical Oncology (ESMO) sollen Patienten mit nicht-kleinzelligem Lungenkarzinom (NSCLC), nicht-medullärem Schilddrüsenkarzinom (MTC) oder anderen soliden Tumoren, sofern eine formalinfixierte, in Paraffin eingebettete (FFPE) Probe verfügbar ist, auf den Nachweis von RET-Fusionen gescreent werden. Wenn NGS nicht verfügbar ist, sind Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung (FISH) oder Reverse-Transkription-Polymerase-Kettenreaktion (RT-PCR) bei NSCLC und Nicht-MTC indiziert, abhängig von der lokalen Verfügbarkeit, den Kosten und/oder der Anzahl der Tumorzellen.³⁴

Nicht-kleinzelliges Lungenkarzinom

Die ESMO Working Group for Precision Medicine empfiehlt, dass eine Tumor- (oder Plasma-)Probe eines Patienten mit fortgeschrittenem nicht-plattenepithelialem NSCLC mittels NGS-Technologie profiliert wird, um Alterationen des Levels 1 nachzuweisen. Da jedoch weiterhin neue genomische Alterationen auftreten, die als ESMO Scale for Clinical Actionability of molecular Targets (ESCAT) Level I klassifiziert werden, ist die Definition eines optimalen Ansatzes zur Implementierung der Tumor-NGS im klinischen Management des fortgeschrittenen nicht-plattenepithelialen NSCLC unerlässlich geworden.³⁵

Allgemein empfehlen die International Association for the Study of Lung Cancer (IASLC), das College of American Pathologists (CAP) und die Association for Molecular Pathology (AMP), dass Patienten mit Adenokarzinom auf Epidermal growth factor receptor (EGFR), Anaplastic lymphoma kinase (ALK) und ROS1-Varianten getestet werden. Es wird zudem empfohlen, dass B-rapidly accelerated fibrosarcoma (BRAF) in ein breiteres Panel aufgenommen werden könnte.^20,21

Tabelle 2 bietet einen Überblick über die klinischen Leitlinien zur RET-Testung beim Lungenkarzinom.  

Abkürzungen: ALK = Anaplastic lymphoma kinase; AMP = Association for Molecular Pathology; CAP = College of American Pathologists; EGFR = Epidermal growth factor receptor; ESCAT = ESMO Scale for Clinical Actionability of molecular Targets; ESMO = European Society for Medical Oncology; FISH = Fluorescence in situ hybridization; IASLC = International Association for the Study of Lung Cancer; NCCN = National Comprehensive Cancer Network; NGS = Next-generation sequencing; NSCLC = Nicht-kleinzelliges Lungenkarzinom; RET = Rearranged during transfection; RT-PCR = Reverse-transcription polymerase chain reaction.

^a NCCN® übernimmt keinerlei Gewährleistung hinsichtlich Inhalt, Nutzung oder Anwendung und lehnt jegliche Verantwortung für deren Anwendung oder Nutzung in jeglicher Weise ab.

^b Die NCCN®-Leitlinien für NSCLC enthalten Empfehlungen zu einzelnen Biomarkern, die getestet werden sollen, und empfehlen Testverfahren, unterstützen jedoch keine spezifischen kommerziell verfügbaren Biomarker-Assays.

^c Kategorie 2A: Basierend auf niedrigerer Evidenz besteht ein einheitlicher NCCN-Konsens, dass die Intervention geeignet ist.

Schilddrüsenkarzinom

Das medulläre Schilddrüsenkarzinom stellt eine Untergruppe von etwa 1 % bis 2 % aller Schilddrüsenkarzinom-Fälle dar.³⁷ Etwa 75 % der MTC-Fälle sind sporadisch und 25 % sind hereditär.³⁷ Molekulare Testung kann das somatische MTC als multiple endokrine Neoplasie (MEN) 2A (einschließlich der assoziierten konjugierten Linolensäure oder des Morbus Hirschsprung) oder MEN2B klassifizieren. Die Leitlinien unterscheiden sich je nachdem, wie das somatische MTC klassifiziert wird.³⁸

Molekulare Testung kann auch das Vorliegen von RET bestimmen. Die meisten Patienten mit MEN2A oder MEN2B und familiärem MTC weisen RET-Keimbahnmutationen auf, und etwa 50 % der Patienten mit sporadischem MTC weisen somatische RET-Mutationen.³⁸

Etwa 15 % bis 30 % der Schilddrüsenknoten werden zum Zeitpunkt der Diagnose durch Feinnadelaspiration als zytologisch unbestimmt eingestuft. Molekulare Testung wurde entwickelt, um die Diagnose und das angemessene Management dieser Läsionen zu unterstützen und um

• unnötige Operationen bei gutartigen Schilddrüsenknoten zu vermeiden
• Hochrisikokarzinome für eine mögliche totale Thyreoidektomie zu identifizieren, und
• prämaligne Knoten mit niedrigem bis mittlerem Risiko für eine mögliche Lobektomie zu identifizieren.³⁹

Tabelle 3 bietet einen Überblick über RET-Testleitlinien beim Schilddrüsenkarzinom.

Abkürzungen: ATA = American Thyroid Association; BRAF = B-rapidly accelerated fibrosarcoma; CLA = Conjugated linoleic acid; ESMO = European Society for Medical Oncology; FFPE = Formalinfixiert, in Paraffin eingebettet; FNA = Feinnadelaspiration; HD = Morbus Hirschsprung; MEN = Multiple endokrine Neoplasie; MTC = Medulläres Schilddrüsenkarzinom; NCCN = National Comprehensive Cancer Network; NGS = Next-generation sequencing; Q-PCR = Quantitative real-time polymerase chain reaction; RAI = Radioaktives Iod; RET = Rearranged during transfection; SUSP = Malignitätsverdächtig; WT = Wildtyp.

^a Molekulare Marker sollten mit Vorsicht und im Kontext klinischer, radiologischer und zytologischer Merkmale jedes einzelnen Patienten interpretiert werden.

^b NCCN® übernimmt keinerlei Gewährleistung hinsichtlich Inhalt, Nutzung oder Anwendung und lehnt jegliche Verantwortung für deren Anwendung oder Nutzung in jeglicher Weise ab.

^c Spezifische Mutationstestung und genetische Beratung bei Familienmitgliedern sollten sich anschließen.

Referenzen

1. Drilon A, Hu ZI, Lai GGY, Tan DSW. Targeting RET-driven cancers: lessons from evolving preclinical and clinical landscapes. Nat Rev Clin Oncol. 2018;15(3):151-167. https://doi.org/10.1038/nrclinonc.2017.175
2. Mulligan LM. RET revisited: expanding the oncogenic portfolio. Nat Rev Cancer. 2014;14(3):173-186. https://doi.org/10.1038/nrc3680
3. Scott JA, Katzen HI, Lennerz JK, et al. Real world testing and treatment patterns among patients with stage IV NSCLC: a retrospective observational study. J Clin Oncol. 2023;41(16 suppl):9030-9030. https://doi.org/10.1200/JCO.2023.41.16_suppl.9030
4. Levy BP, Nguyen D, Shih Y-H, et al. Association between real-world, upfront next generation sequencing and overall survival (OS) in advanced non-small cell lung cancer (aNSCLC). J Clin Oncol. 2023;41(16 suppl):9117-9117. https://doi.org/10.1200/JCO.2023.41.16_suppl.9117
5. Nesline MK, DePietro P, Cooper M, et al. The impact of single gene testing (SGT) on subsequent comprehensive genomic profiling (CGP) success in community oncology practice for advanced non-small cell lung cancer (NSCLC). J Clin Oncol. 2023;41(16 suppl):6506-6506. https://doi.org/10.1200/JCO.2023.41.16_suppl.6506
6. Neinrmanno N, Denis MG, Thress KS, et al. Guide to detecting epidermal growth factor receptor (EGFR)-Mutationen verwendet in ctDNA of patients with advanced non-small-cell lung cancer. Oncotarget. 2017;8(7):12501-12516. https://doi.org/10.18632/oncotarget.13915
7. Meric-Bernstam F, Johnson A, Holla V, et al. A decision support framework for genomically informed investigational cancer therapy. JNCI. 2015;107(7). https://doi.org/10.1093/jnci/djv098
8. Garinet S, Laurent-Puig P, Blons H, Oudart JB. Current and future molecular testing in NSCLC, what can we expect from new sequencing technologies? J Clin Med. 2018;7(6):144. https://doi.org/10.3390/jcm7060144
9. Drilon A, Wang L, Arcila ME, et al. Broad, hybrid capture-based next-generation sequencing identifies actionable genomic alterations in lung adenocarcinomas otherwise negative for such alterations by other genomic testing approaches. Clin Cancer Res. 2015;21(16):3631-3639. https://doi.org/10.1158/1078-0432.CCR-14-2683
10. Ferrara R, Auger N, Auclin E, Besse B. Clinical and translational implications of RET-Rearrangements nach in non–small cell lung cancer. J Thorac Oncol. 2018;13(1):27-45. https://doi.org/10.1016/j.jtho.2017.10.021
11. Hou H, Yang X, Zhang J, et al. Discovery of targetable genetic alterations in advanced non-small cell lung cancer using a next-generation sequencing-based circulating tumor DNA assay. Sci Rep. 2017;7(1):14605. https://doi.org/10.1038/s41598-017-14962-0
12. Villaflor V, Won B, Nagy R, et al. Biopsy-free circulating tumor DNA assay identifies actionable-Mutationen verwendet in lung cancer. Oncotarget. 2016;7(41):66880-66891. https://doi.org/10.18632/oncotarget.11801
13. Khoo C, Rogers TM, Fellowes A, et al. Molecular methods for somatic mutation testing in lung adenocarcinoma: EGFR and beyond. Transl Lung Cancer Res. 2015;4(2):126-141. https://doi.org/10.3978/j.issn.2218-6751.2015.01.10
14. Vnencak-Jones CL, Berger MF, Pao W. Types of molecular tumor testing. My Cancer Genome. 2020. Updated February 3, 2020. Accessed February 12, 2020. https://www.mycancergenome.org/content/molecular-medicine/types-of-molecular-tumor-testing/
15. Yu Y, Dong L, Li D, et al. Targeted DNA sequencing detects-Mutationen verwendet related to susceptibility among familial non-medullary thyroid cancer. Sci Rep. 2015;5(1):16129. https://doi.org/10.1038/srep16129
16. Davies KD, Le AT, Sheren J, et al. Comparison of molecular testing modalities for detection of ROS1-Rearrangements nach in a cohort of positive patient samples. J Thorac Oncol. 2018;13(10):1474-1482. https://doi.org/10.1016/j.jtho.2018.05.041
17. Lih CJ, Harrington RD, Sims DJ, et al. Analytical validation of the next-generation sequencing assay for a nationwide signal-finding clinical trial: molecular analysis for therapy choice clinical trial. J Mol Diagn. 2017;19(2):313-327. https://doi.org/10.1016/j.jmoldx.2016.10.007
18. Vaughn CP, Costa JL, Feilotter HE, et al. Simultaneous detection of lung fusions using a multiplex RT-PCR next generation sequencing-based approach: a multi-institutional research study. BMC Cancer. 2018;18(1):828. https://doi.org/10.1186/s12885-018-4736-4
19. Yang SR, Aypar U, Rosen EY, et al. Performance comparison of commonly used assays to detect RET fusions. Clin Cancer Res. 2020;27(5):1316-1328. https://doi.org/10.1158/1078-0432.CCR-20-3208
20. Lindeman NI, Cagle PT, Aisner DL, et al. Updated molecular testing guideline for the selection of lung cancer patients for treatment with targeted tyrosine kinase inhibitors: guideline from the College of American Pathologists, the International Association for the Study of Lung Cancer, and the Association for Molecular Pathology. J Thorac Oncol. 2018;13(3):323-358. https://doi.org/10.1016/j.jtho.2017.12.001
21. Lindeman NI, Cagle PT, Aisner DL, et al. Updated molecular testing guideline for the selection of lung cancer patients for treatment with targeted tyrosine kinase inhibitors: guideline from the College of American Pathologists, the International Association for the Study of Lung Cancer, and the Association for Molecular Pathology. Arch Pathol Lab Med. 2018;142(3):321-346. https://doi.org/10.5858/arpa.2017-0388-CP
22. Zhang T, Lu Y, Ye Q, et al. An evaluation and recommendation of the optimal methodologies to detect RET gene-Rearrangements nach in papillary thyroid carcinoma. Genes Chromosomes Cancer. 2015;54(3):168-176. https://doi.org/10.1002/gcc.22229
23. Caria P, Dettori T, Frau DV, et al. Assessing RET/PTC in thyroid nodule fine-needle aspirates: the FISH point of view. Endocr Relat Cancer. 2013;20(4):527-536. https://doi.org/10.1530/ERC-13-0157
24. Colato C, Vicentini C, Cantara S, et al. Break-apart interphase fluorescence in situ hybridization assay in papillary thyroid carcinoma: on the road to optimizing the cut-off level for RET/PTC-Rearrangements nach. Eur J Endocrinol. 2015;172(5):571-582. https://doi.org/10.1530/EJE-14-0930
25. Chen F, Clark DP, Hawkins AL, et al. A break-apart fluorescence in situ hybridization assay for detecting RET translocations in papillary thyroid carcinoma. Cancer Genet Cytogenet. 2007;178(2):128-134. https://doi.org/10.1016/j.cancergencyto.2007.07.006
26. Go H, Jung YJ, Kang HW, et al. Diagnostic method for the detection of KIF5B-RET transformation in lung adenocarcinoma. Lung Cancer. 2013;82(1):44-50. https://doi.org/10.1016/j.lungcan.2013.07.009
27. Lee SE, Lee B, Hong M, et al. Comprehensive analysis of RET and ROS1 rearrangement in lung adenocarcinoma. Mod Pathol. 2015;28(4):468-479. https://doi.org/10.1038/modpathol.2014.107
28. Musholt TJ, Staubitz JI, Cámara RJ, et al. Detection of RET-Rearrangements nach in papillary thyroid carcinoma using RT-PCR and FISH techniques - a molecular and clinical analysis. Eur J Surg Oncol. 2019;45(6):1018-1024. https://doi.org/10.1016/j.ejso.2018.11.009
29. Tsuta K, Kohno T, Yoshida A, et al. RET-rearranged non-small-cell lung carcinoma: a clinicopathological and molecular analysis. Br J Cancer. 2014;110(6):1571-1578. https://doi.org/10.1038/bjc.2014.36
30. Radonic T, Geurts-Giele WRR, Samsom KG, et al. RET FISH analysis is a sensitive but highly unspecific screening method for RET fusions in lung cancer. J Thorac Oncol. Published online February 12, 2021. https://doi.org/10.1016/j.jtho.2021.01.1619
31. Cerilli LA, Mills SE, Rumpel CA, et al. Interpretation of RET immunostaining in follicular lesions of the thyroid. Am J Clin Pathol. 2002;118(2):186-193. https://doi.org/10.1309/53UC-4U88-RRTN-H33G
32. Rebelo S, Domingues R, Catarino AL, et al. Immunostaining and RT-PCR: different approaches to search for RET-Rearrangements nach in patients with papillary thyroid carcinoma. Int J Oncol. 2003;23(4):1025-1032. https://doi.org/10.3892/ijo.23.4.1025
33. Kim SW, Roh J, Park CS. Immunohistochemistry for pathologists: protocols, pitfalls, and tips. J Pathol Transl Med. 2016;50(6):411-418. https://doi.org/10.4132/jptm.2016.08.08
34. Belli C, Penault-Llorca F, Ladanyi M, et al. ESMO recommendations on the standard methods to detect RET-Fusionen und-Mutationen verwendet in daily practice and clinical research. Ann Oncol. 2021;32(3):337-350. https://doi.org/10.1016/j.annonc.2020.11.021
35. Mosele MF, Westphalen CB, Stenzinger A, et al. Recommendations for the use of next-generation sequencing (NGS) for patients with advanced cancer in 2024: a report from the ESMO Precision Medicine Working Group. Ann Oncol. Published online May 27, 2024. https://doi.org/10.1016/j.annonc.2024.04.005
36. Referenced with permission from the NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology (NCCN Guidelines®) for Neinn-Small Cell Lung Cancer V.2.2022. © National Comprehensive Cancer Network, Inc. 2022. All rights reserved. Accessed March 16, 2022. To view the most recent and complete version of the guideline, go online to NCCN.org
37. Medullary thyroid cancer. American Thyroid Association. Accessed February 12, 2020. https://www.thyroid.org/medullary-thyroid-cancer/
38. Wells SA Jr, Asa SL, Dralle H, et al. Revised American Thyroid Association guidelines for the management of medullary thyroid carcinoma. Thyroid. 2015;25(6):567-610. http://doi.org/10.1089/thy.2014.0335
39. Nishino M, Nikiforova M. Update on molecular testing for cytologically indeterminate thyroid nodules. Arch Pathol Lab Med. 2018;142(4):446-457. https://doi.org/10.5858/arpa.2017-0174-RA
40. Haugen BR, Alexander EK, Bible KC, et al. 2015 American Thyroid Association management guidelines for adult patients with thyroid nodules and differentiated thyroid cancer: the American Thyroid Association Guidelines Task Force on thyroid nodules and differentiated thyroid cancer. Thyroid. 2016;26(1):1-33. https://doi.org/10.1089/thy.2015.0020
41. Filetti S, Durante C, Hartl D, et al. Schilddrüsenkarzinom: ESMO clinical practice guidelines for diagnosis, treatment and follow-up. Ann Oncol. 2019;30(12):1856-1883. https://doi.org/10.1093/annonc/mdz400
42. Referenced with permission from the NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology (NCCN Guidelines®) for Guideline for Thyroid Carcinoma V.3.2021. © National Comprehensive Cancer Network, Inc 2021. Accessed March 16, 2022. To view the most recent and complete version of the guideline, go online to NCCN.org.