En un estudio in vitro, se utilizaron células REC‑1 de linfoma de células del manto (LCM) para generar mecanismos de resistencia tras el tratamiento con ibrutinib y con inhibidores de la tirosina‑quinasa de Bruton (BTK) no covalentes, incluido pirtobrutinib. Para cada tratamiento se emplearon seis líneas celulares. Tras el tratamiento con ibrutinib, todas las líneas REC‑1 adquirieron la mutación BTK C481F.1 

Después del tratamiento con pirtobrutinib, de las tres líneas celulares resistentes a pirtobrutinib, una adquirió la mutación BTK A428D y dos presentaron mutaciones PLCG2 R727L y S1079R.1

Se observó que las mutaciones BTK G409R y D539H en líneas celulares con BTK mutado eran sensibles a inhibidores covalentes de BTK, mientras que otras mutaciones de BTK permanecieron resistentes tanto a inhibidores covalentes como no covalentes de BTK.1

Además, excepto en las células con mutación BTK G409R, todas las líneas REC‑1 resistentes a inhibidores no covalentes de BTK mostraron una mayor dependencia de BCL2 y sensibilidad a venetoclax.1

Un análisis multi‑ómico a nivel de célula única combinó:

• Secuenciación de ARN unicelular para medir la expresión génica
• Ensayo de cromatina accesible a transposasas mediante secuenciación para evaluar la accesibilidad de la cromatina
• Secuenciación de ADN para definir alteraciones genómicas

Se analizaron muestras de 13 pacientes con LCM en momentos sensibles y resistentes al tratamiento, lo que dio lugar al análisis de 113.143 células individuales. Las células B malignas representaron el 50,28 % del conjunto de datos.2

El análisis identificó mecanismos de resistencia tanto genéticos como no genéticos. La resistencia genética implicó la adquisición progresiva de ganancias en el número de copias, mientras que la resistencia no genética estuvo impulsada por una reprogramación transcripcional y epigenética.2

El análisis de vías mostró un enriquecimiento de la señalización de NF‑κB y de programas génicos relacionados con la segregación cromosómica, la mitosis y la localización proteica. RAD21, un componente del complejo cohesina, se identificó como un regulador clave de la resistencia, observándose que su eliminación in silico desplazaba las células resistentes hacia un estado más sensible. Se identificó una población de células B malignas con características tipo célula madre, con reprogramación metabólica y rasgos de transición epitelio‑mesénquima, con dos subclústeres que mostraban características distintivas de tipo epitelial y tipo mesenquimatoso. Estos hallazgos destacan a RAD21 y la heterogeneidad tipo célula madre como impulsores de la resistencia terapéutica.2

En un estudio in vitro en células de linfoma de células del manto (LCM) tratadas con pirtobrutinib e ibrutinib, se compararon el ciclo celular y la inducción de apoptosis de ambos fármacos, así como los genes diferencialmente expresados tras el tratamiento.3

Pirtobrutinib inhibió de forma más eficaz la proliferación de células de LCM, incluidas aquellas resistentes a ibrutinib y venetoclax (pirtobrutinib frente a ibrutinib, p<0,01). Además, el tratamiento con pirtobrutinib fue superior en la inducción de apoptosis a las 24 horas en todas las líneas celulares de LCM evaluadas (p<0,05).3 

Mediante análisis transcriptómico, se observó que el tratamiento con pirtobrutinib redujo la expresión de dianas de MYC y de la vía PI3K/AKT. El análisis de enriquecimiento génico mostró que pirtobrutinib se asoció con firmas de puntos de control G2/M y dianas de E2F. Asimismo, el tratamiento con pirtobrutinib indujo detención del ciclo celular en la fase G2/M, mientras que el tratamiento con ibrutinib no lo hizo..3

En un modelo in vivo de xenoinjerto murino, la combinación de pirtobrutinib y venetoclax incrementó la potencia antitumoral (p<0,001) y logró una mayor eficacia en la reducción del tamaño tumoral (p<0,001) en comparación con la combinación de ibrutinib y venetoclax.3

Un estudio evaluó la eficacia de la combinación de pirtobrutinib y venetoclax en líneas celulares de LCM y en modelos murinos de xenoinjerto en células resistentes a ibrutinib, venetoclax y a la terapia con linfocitos T con receptor quimérico de antígeno (CAR‑T).4

In vitro, la combinación demostró una citotoxicidad mejorada en líneas celulares de LCM y en muestras de pacientes, incluidas aquellas resistentes a ibrutinib, venetoclax y CAR‑T. La secuenciación de ARN reveló 967 genes diferencialmente expresados en el grupo tratado con la combinación, con una regulación a la baja significativa de vías oncogénicas como las dianas de MYC, la señalización mTORC1, la glucólisis y la fosforilación oxidativa. In vivo, la terapia combinada suprimió de forma significativa el crecimiento tumoral, prolongó la supervivencia y mantuvo un estado libre de tumor en los modelos murinos, superando a las monoterapias.4